化妆品舒缓功效评价 体外NO炎症介质含量测定 脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7测试方法

【适用范围】 本文件规定了细菌脂多糖诱导巨噬细胞系RAW264.7分泌炎症介质NO含量检测的基本技术要求。 本文件适用于水溶性化妆品原料以及成品的舒缓功效评价。 【主要技术内容】 巨噬细胞被LPS或干扰素γ激活后，在NO合成酶的作用下合成NO。LPS激活巨噬细胞释放NO的过程会伴随前列腺素和肿瘤坏死因子等物质的合成与释放，从而导致机体抗炎和抗菌一系列免疫连锁反应的发生。文献指出，多种炎症性或免疫性的动物试验证实，NO浓度明显增高，同时抑制NO的合成可以使得典型的炎症症状得到改善。 LPS诱导RAW264.7是探究炎症机理的经典细胞模型，通过对比空白对照组、阴性对照组与待测样品组给药24h孵育后NO的含量差异，评价待测样品抑制NO的作用。 NO含量的检测原理是经典的亚硝酸盐比色法：NO液体环境下容易形成亚硝酸盐，亚硝酸盐通过重氮反应生成重氮化合物，再通过偶联反应，生成有颜色的化合物，通过检测波长540nm下的吸光度，计算NO含量。