黑木耳液体菌种生产技术规程

【适用范围】 本标准规定了黑木耳液体菌种生产的基本要求，主要包括生产场地、厂房和布局、设施设备、生产工艺流程、质量要求、技术要求、生产记录与存档、菌种贮藏。 本标准适用于黑木耳液体菌种的生产。 【主要技术内容】 生产工艺流程 母种→摇瓶液体种 ↓ 培养料配制→投料→灭菌→冷却→接种→培养→发酵罐液体种 培养基 母种培养基使用附录A中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖 琼脂培养基（CPDA）。 液体种培养基根据黑木耳品种及当地原料的要求使用适宜配方（见附录B），严格掌握初始pH。 8 母种 母种继代培养后须按NY/T 1846 规定抽样，并进行感官检验和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生 产流程。母种质量要求符合GB 19169及NY/T 1742 关于母种质量的规定。 摇瓶液体菌种生产 1 培养基分装及灭菌 摇瓶液体种培养基装量为容器体积的1/4至1/3，分装后立即灭菌。按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程， 0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～126℃），维持25min。 灭菌后的摇瓶液体种培养基于30℃±1℃ 培养箱恒温培养48小时后，观察确认无混浊、无异味，可 用于接种培养。 2 接种 按无菌操作规程，将母种斜面菌丝体切割成2mm～4mm颗粒，移入摇瓶培养基中，每100 mL液体培养 基接种菌丝体颗粒1颗～3颗。 3 培养 菌种培养温度26℃±1℃，空气相对湿度55%～65%，避光振荡培养。往复式摇床振荡频率60次～120 次/分， 旋转式摇床振荡频率150转～180转/分。每日检查生长状态，及时检出浑浊、异味、泡沫异常 的不合格菌种。 摇瓶静置1分钟后，菌丝球体积占比液体培养基体积的4/5以上，可结束培养。 发酵罐液体菌种生产 1 空气过滤系统检查 使用前要拆分检查滤芯，要求无油污、料污、无破损，外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。 滤芯在额定风量下，对粒径0.1～0.2μm粒子的过滤效率大于99.99%，空气阻力低于280pa。 2 发酵罐检查与清洗 检查罐上全部阀门、安全阀、压力表、要求完好，工作正常。对罐体内、外和全部阀门用流水进行 冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。 3 空消灭菌 发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置及更换品种时，应进行空消灭菌。有内置电加热棒的培养器 加水至容积的80%加热至121℃，维持40min。用外源蒸汽灭菌的培养器，蒸汽压力达到0.1Mpa～0.12Mpa （121℃～124℃），维持40min。 4 投料定容 将配制好的培养基材料搅拌均匀，倒入或用泵抽入发酵罐中，加水定容至所需体积。培养基投料总 量为罐体总容积的70%～80%。 5 灭菌和冷却 按高压蒸汽灭菌方法操作，培养器内压力达到0.1Mpa～0.12Mpa，培养基温度达到121℃～124℃、 保持时间60 min～90 min。 灭菌结束将培养基降温至24℃～28℃。降温过程中要及时向培养器内补充过滤空气，防止罐压回零。 6 接种 利用火焰保护接种，接种量为罐内培养基总量的0.1%～0.5%。 7 培养 发酵罐通风量每分钟1：0.5～1.2 V／V(料液体积／空气体积)，调节罐压保持在0.02 Mpa～0.04 Mpa，培养温度调节在24℃～26℃，培养7d～10d可达到香菇液体菌种成品标准。特殊品种根据特殊需求 具体设定。 8 检测和判定 培养开始3d后每日从发酵罐中取出样品进行检测。按照NY/T 1846 中菌丝微观特征、细菌霉菌检验 方法检验，如异常则排空罐内培养物，空消，重新生产。 发酵终 pH 4.5-5.5，每100ml液体菌种菌丝干离心后重量2.0～2.8g/100ml。合格黑木耳液体菌种 球状菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色。菌液稍粘稠，有大量球状菌丝体悬浮、分布均匀、菌球浓白清晰， 有黑木耳液体菌种培养时特有的香气，无异味。 9 贮藏 成品液体菌种应及时应用。 特殊情况下，培养结束后在发酵罐内通入无菌空气，保持罐压0.02Mpa～0.04Mpa，环境温度6℃～ 10℃，可保存24h。