香菇栽培种工厂化生产技术规程

【适用范围】 本标准规定了利用液体菌种生产香菇栽培种的有关术语和定义、液体菌种制备与相关技术要求、栽培种制作工艺、栽培种质量检查、生产记录与存档、留样、标签标志包装运输。 本标准适用于香菇栽培种的工厂化生产。 【主要技术内容】 生产工艺流程 母种→摇瓶液体种→发酵罐液体种 ↓ 培养料配制→装袋→灭菌→冷却→接种→培养→ 栽培种 培养基 母种培养基使用附录A中A.1规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）或A.2规定的综合马铃薯葡萄糖 琼脂培养基（CPDA）。液体种培养基根据香菇品种及当地原料的要求使用适宜配方（见附录B），严格 掌握初始pH。 栽培种培养基配方参照NY/T 528 标准附录B 原种和栽培种常用培养基配方及其适用种类，根据香 菇品种及当地原料的要求选择使用。 母种 母种继代培养后须按NY/T 1846 规定抽样，并进行感官检验和菌丝微观特征检验，合格菌种进入生 产流程。母种质量要求符合NY/T 1742 关于母种生产的规定。 摇瓶液体菌种生产 1 培养基分装及灭菌 摇瓶液体种培养基装量为容器体积的1/4至1/3，分装后立即灭菌。按常规高压蒸汽灭菌锅操作规程， 0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～126℃），维持25min。 灭菌后的摇瓶液体种培养基于30℃±1℃ 培养箱恒温培养48小时后，观察确认无混浊、无异味，可 用于接种培养。 2 接种 按无菌操作规程，将母种斜面菌丝体切割成2mm～4mm颗粒，移入摇瓶培养基中，每100 mL液体培养 基接种菌丝体颗粒1颗～3颗。 3 培养 菌种培养温度26℃±1℃，空气相对湿度55%～65%，避光振荡培养。往复式摇床振荡频率60次～120 次/分， 旋转式摇床振荡频率150转～180转/分。每日检查生长状态，及时检出浑浊、异味、泡沫异常 的不合格菌种。 摇瓶静置1分钟后，菌丝球体积占比液体培养基体积的4/5以上，可结束培养。 发酵罐液体菌种生产 1 空气过滤系统检查 使用前要拆分检查滤芯，要求无油污、料污、无破损，外壳内外壁要求无污物、光亮洁净。 滤芯在额定风量下，对粒径0.1～0.2μm粒子的过滤效率大于99.99%，空气阻力低于280pa。 2 发酵罐检查与清洗 检查罐上全部阀门、安全阀、压力表、要求完好，工作正常。对罐体内、外和全部阀门用流水进行 冲洗，达到无死角、内壁无任何培养料残余物的洁净程度。 3 空消灭菌 发酵罐初次使用、出现染菌、长期放置及更换品种时，应进行空消灭菌。有内置电加热棒的培养器 加水至容积的80%加热至121℃，维持40min。用外源蒸汽灭菌的培养器，蒸汽压力达到0.1Mpa～0.12Mpa （121℃～124℃），维持40min。 4 投料定容 将配制好的培养基材料搅拌均匀，倒入或用泵抽入发酵罐中，加水定容至所需体积。培养基投料总 量为罐体总容积的70%～80%。 5 灭菌和冷却 按高压蒸汽灭菌方法操作，培养器内压力达到0.1Mpa～0.12Mpa，培养基温度达到121℃～124℃、 保持时间60 min～90 min。 灭菌结束将培养基降温至24℃～28℃。降温过程中要及时向培养器内补充过滤空气，防止罐压回零。 6 接种 利用火焰保护接种，接种量为罐内培养基总量的0.1%～0.5%。 7 培养 发酵罐通风量每分钟1：0.5～1.2 V／V(料液体积／空气体积)，调节罐压保持在0.02 Mpa～0.04 Mpa，培养温度调节在24℃～26℃，培养7d～10d可达到香菇液体菌种成品标准。特殊品种根据特殊需求 具体设定。 8 检测和判定 培养开始3d后每日从发酵罐中取出样品进行检测。按照NY/T 1846 中菌丝微观特征、细菌霉菌检验 方法检验，如异常则排空罐内培养物，空消，重新生产。 发酵终 pH 3.5-4.0，每100ml液体菌种菌丝干离心后重量1.4～2.0g/100ml。合格香菇液体菌种球 状菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色。菌球分布均匀、浓白清晰，有香菇液体菌种培养时特有的香气，无异 味。 栽培种生产 1 配料装袋 采用配套机械二级拌料法。按配方比例将木屑粗料先预湿后再同其他主料混合进行一级拌料，然后 再加入辅料进行二次拌料，要求拌料均匀、含水量达标。机械窝口，插入专用塑料芯塞。 2 灭菌和冷却 按高压蒸汽灭菌规程操作，排除冷空气后，升温至121℃、压力0.15MPa持续2.5h。灭菌后采用阶梯 渐进式排气降压处理。 降压结束迅速进入冷却室，开启降温处理。当袋内温度降至25℃下可以接种。 3 接种 液体菌种接种量为20ml～30ml/袋，接种后及时用无菌海绵塞封口。 4 培养 培养温度以袋内中心温度为标准，保持袋内温度22℃～23℃。培养室内空间相对湿度控制在55%以 下，避光培养。接种5d后启动内循环通风，12d～15d加强通风保持温度低于25℃。当菌丝长满菌袋后， 降低培养室温度至10℃～15℃，持续内循环通风3-5d。 5 抽样和检测 按GB 19170规定进行抽样和检测。 6 入库 合格菌种放于洁净的1～4℃冷库中短期保存备用。