化妆品舒缓功效测试 体外巨噬细胞一氧化 氮（NO）释放抑制测定

【适用范围】 本文件规定了体外巨噬细胞一氧化氮（NO）释放抑制测定的原理、材料、试验方法、结果计算、质 量控制、结果评价和结论。 本文件提供了一种化妆品及原料抑制LPS诱导体外巨噬细胞释放一氧化氮（NO）的测试方法，为化 妆品及原料舒缓功效宣称提供科学支持。 本文件适用于通过由外部刺激引起的炎症反应通路而达到舒缓效果的样品，不适用于通过其他通路 作用、无法在水溶液中均匀分散、无法透过皮肤屏障、或因细胞毒性较大导致测试浓度偏低的样品。 【主要技术内容】 1、NO 抑制与舒缓功效原理 细菌脂多糖(lipopolysaccharide,简称LPS)与巨噬细胞表面抗原识别受体相结合，诱导巨噬细胞释 放炎症介质NO，过多的NO可以促进巨噬细胞释放IL-6、TNF-α等炎症因子，而这些炎症因子又可以促进 细胞分泌更多的NO，形成恶性循环，加重炎症反应。通过测定给药后样品组的NO抑制率，评价样品对NO 释放的抑制作用，从而评价样品是否具有舒缓功效。 2、NO 相对含量测试原理 NO在体内或水溶液中极易氧化成二氧化氮离子，在酸性条件下，二氧化氮离子与重氮盐磺胺发生重氮反应，并生成重氮 化合物，后者进一步与萘基乙烯基二胺发生耦合反应，该反应生成的产物浓度与NO浓度具有线性关系， 在540nm处有最大吸收峰。用酶标仪测定540nm处光密度（OD）值，计算NO的相对含量。