标准摘要
【适用范围】 本标准规定了刺梨及其制品中总酚含量测定的紫外分光光度法。 本标准适用于刺梨鲜果、刺梨干果、刺梨果脯、刺梨冻干粉、刺梨喷干粉、刺梨原汁、刺梨浓缩汁等刺梨及其制品中总酚含量的测定。 【主要技术内容】 4 方法原理 在碱性条件下利用多酚的还原性，多酚可以将磷钨酸钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量成正相关，在760 nm下测定吸光度值，外标法定量。 5 试剂 5.1 试剂 除另有规定外，仅使用分析纯试剂和GB/T 6682规定的一级水。 5.1.1 没食子酸（C7H6O5，CAS：149-91-7）标准品：纯度 ≥ 98%。 5.1.2 无水乙醇（C2H6O）。 5.1.3 碳酸钠（Na2CO3）。 5.1.4 福林酚试剂（Folin-Phenol，BR，1 mol/L）。 5.2 试剂配制 5.2.1 没食子酸对照品储备液（0.1 mg/mL）：精密称取10 mg（精确至0.1 mg）没食子酸标准品，加入少量水溶解，转移至100 mL棕色容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，4 ℃避光保存。 5.2.2 没食子酸标准系列浓度溶液：准确量取没食子酸对照品储备液（5.2.1）0.0 mL、0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL、1.25 mL、1.5 mL于25 mL棕色容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，4 ℃保存。没食子酸标准系列浓度为0 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、3.0 μg/mL、4.0 μg/mL、5.0 μg/mL、6.0 μg/mL。现用现配。 5.2.3 12%碳酸钠溶液：称取无水碳酸钠12 g（精确至0.01 g），加适量水溶解，转移至100 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀。 5.2.4 80%乙醇提取剂：量取无水乙醇80 mL，置100 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度。 6 仪器和设备 6.1 分光光度计。 6.2 高速破壁机。 6.3 超声波提取器。 6.4 高速冷冻离心机：转速10000 rpm。 6.5 分析天平：感量0.0001 g。 6.6 涡旋振荡器。 6.7 组织捣碎机。 7 分析步骤 7.1 试样制备 将刺梨鲜果（3.1）刺梨鲜果去皮、去籽，组织捣碎机打浆，混合均匀，备用；去除刺梨果干（3.2）和刺梨果脯（3.3）中可见杂质，用高速破壁机粉碎，将其制成粉状，备用；刺梨冻干粉（3.4）和刺梨喷干粉（3.5）研磨均匀备用。 7.2 试样提取 7.2.1 固态试样： 取7.1样品0.5 ~ 2 g，精密称定（精确到0.0001 g），置50 mL具塞离心管内，加5 mL水浸润样品，加80%乙醇溶液30 mL超声处理90分钟，超声过程中振摇数次，保持固相完全分散。超声结束后离心（9000 rmp、4 ℃）5分钟，滤过，用水洗涤沉淀物，合并洗液及滤液，加水定容至50 mL容量瓶，即得。 7.2.2 液态试样： 刺梨原汁（3.6）、刺梨浓缩汁（3.7）等液体样品，精密量取样品1~10 mL，置50 mL具塞离心管内，加80%乙醇溶液30 mL超声处理90分钟。超声结束后离心（9000 rmp、4 ℃）5分钟，滤过，用水洗涤沉淀物，合并洗液及滤液，加水定容至50 mL容量瓶，即得。 7.3 标准工作曲线 准确量取没食子酸标准系列浓度溶液（5.2.2）1.0 mL于25 mL刻度试管中，加1.0 mol/L Folin-Phenol试剂1.0 mL，摇匀后静置5分钟，再加入12%碳酸钠溶液（5.2.3）2.0 mL，加水定容至刻度线，30℃水浴加热90分钟，在760 nm处测定吸光度。以25 mL溶液中没食子酸质量（mg）为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 7.4 空白试验 与试样的测定平行进行，取相同量的所有试剂，采用相同的分析步骤，但不添加试样。 7.5 试样的测定 准确量取提取液（7.2）1 mL，置于25 mL刻度试管中，加入1.0 mol/L Folin-Phenol试剂1.0 mL，再加入12%的碳酸钠溶液（5.2.3）2.0 mL，加水定容至刻度线，30 ℃水浴加热90分钟，在760 nm处测定吸光度。 若样品多酚含量较高（吸光度不在0.1~0.8之间），可适当稀释后再进行分析测定。 8 分析结果的表述 8.1 刺梨鲜果、刺梨干果等固态试样 试样中总酚含量（以没食子酸计）以百分含量（%）表示，按公式（1）进行计算。 x = ……………………（1） 式中: x───试样中总酚含量（以没食子酸计）； m───由标准曲线查出的样品中没食子酸质量，单位为毫克（mg）； M───试样质量，单位为克（g）； d───样品稀释倍数； 计算结果保留小数点后两位。 8.2 刺梨原汁、刺梨浓缩汁等液态试样 样品中总酚含量（以没食子酸计）以百分含量（%）表示，按式（2）计算： x = ……………………（2） 式中: x───试样中总酚含量（以没食子酸计）； m───由标准曲线查出的样品中没食子酸质量，单位为毫克（mg）； v───试样体积，单位为毫升（mL）； d───样品稀释倍数； 计算结果保留小数点后两位。 9 精密度 在重复条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不超过算术平均值的10%。