《斑兰叶（浆、汁、粉）中角鲨烯的测定》

【适用范围】 本标准规定了斑兰叶（浆、汁、粉）中角鲨烯含量的三种测定方法：气相色谱法、气相色谱-质谱法和高效液相色谱法。 本标准适用于斑兰叶（浆、汁、粉）中角鲨烯的测定，其他斑兰制品可参照使用。 当称取样品0.2g时，气相色谱法的定量限为30mg/kg，气相色谱-质谱法的定量限为2.5mg/kg，高效液相色谱法的定量限为30mg/kg。 【主要技术内容】 第一法 气相色谱法 4 原理 样品经过氢氧化钾-乙醇溶液皂化后，其中的角鲨烯用正己烷提取，采用气相色谱法测定，外标法定量。 5 试剂与材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 试剂 氢氧化钾（KOH）。 无水乙醇(CH3CH2OH)。 正己烷(C6H14)：色谱纯。 试剂配制 氢氧化钾-乙醇溶液（约2mol/L）:准确称取（112±0.1）g氢氧化钾，加入200mL的无水乙醇，进行溶解，然后用无水乙醇稀释定容至1000mL。 标准品 角鲨烯标准品（C30H50，CAS号：111-02-4），纯度≥98.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 标准溶液配制 角鲨烯标准储备液（1.00mg/mL）:准确称取按其纯度折算为100%质量的角鲨烯标准品100mg(精确至0.1 mg)，加正己烷溶解并置于100mL棕色容量瓶中，定容至刻度，摇匀，得到浓度为1.00mg/mL的标准储备液。标准储备液可于4℃条件下避光保存3个月。 角鲨烯标准中间液（100μg/mL）:准确吸取1.00mL角鲨烯标准储备液于10mL棕色容量瓶中，用正己烷定容至刻度，混匀备用。 角鲨烯标准系列工作溶液：分别吸取适量角鲨烯标准储备液或中间液，用正己烷稀释，使标准工作溶液浓度分别为10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL。 材料 有机相微孔滤膜：0.22μm。 塑料离心管：15mL。 10mL玻璃试管。 6 仪器和设备 气相色谱仪：配氢火焰离子检测器（FID）。 分析天平：精度0.0001g。 涡旋振荡器。 恒温水浴锅。 离心机。 氮吹仪。 组织捣碎机。 超声仪。 7 试样制备 斑兰叶 取一定数量的具有代表性的样品，用组织捣碎机（6.7）粉碎，样品充分混合均匀后，备用。 斑兰粉、斑兰浆和斑兰汁 取一定数量的具有代表性的样品，充分混合均匀后，备用。 8 分析步骤 称样 准确称取0.2g（精确至0.0001g）试样，置15mL离心管（5.5.2）中。 角鲨烯的提取 于装有试样的离心管中加入2mL氢氧化钾-乙醇（5.2.1）溶液，置超声仪75℃超声皂化30min后，取出离心管，冷却至室温；加入2mL水、1mL正己烷（5.1.3）提取，离心管置涡旋振荡器混匀5min，充分提取后，置于离心机5000r/min离心5min，转移上清液至10mL玻璃试管（5.5.3）中。再用1mL正己烷重复提取操作3次，并将4次提取的上清液合并至10mL玻璃试管中，置于涡旋振荡器中混匀，用氮吹仪吹干，立即加入1mL正己烷复溶，振摇1min，过0.22μm滤膜上机。 气相色谱参考条件 色谱柱：HP-5毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μm）色谱柱，或等效色谱柱。 进样口温度：280℃。 升温程序：160℃保持1min，以15℃/min速率升至220℃保持2min，以5℃/min速率升至280℃保持22min。 载气：高纯氮气（纯度99.999%），流速1.0mL/min，分流比4:1。 FID检测器温度：280℃，氢气流速40mL/min，空气流速300 mL/min，尾吹气（N2）30 mL/min。 进样量：1μL。 标准曲线的制作 将角鲨烯标准系列工作溶液依次按上述推荐色谱条件上机测定，记录色谱图峰面积，以标准工作溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 100μg/mL角鲨烯标准溶液气相色谱图参见附录A中图A.4。