标准摘要
【主要技术内容】 4 基本条件 技术人员、场地选择、厂房设置和布局、设备设施应符合NY/T 528的规定。液体菌种应设独立培养间、空气净化系统、温控设施，配备液体菌种制作、培养、检验所需仪器设备。 5 种源 宜选择经国家、省认定的品种；或选用种性明确、并经过两个以上生产周期试验、适合于设施栽培和工厂化栽培的品种。 6 固体菌种 母种 6.1.1 容器 宜使用18 mm×180 mm或20 mm×200 mm玻璃试管。 6.1.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1000 mL。 6.1.3 配置灭菌 马铃薯煮汁过滤后，加入剩余试剂，加水至1000 mL，加热至琼脂融化并搅拌均匀，分装试管，培养基分装量为试管容量1/5～1/4，121℃灭菌30 min。 6.1.4 冷却 灭菌结束后温度降至65℃±5℃时，在洁净的环境中摆斜面，斜面长度不超过试管长度的2/3。斜面凝固后，按NY/T 528的规定进行试管灭菌效果检验。 6.1.5 接种培养 按NY/T 528的规定执行，做好标记。接种后试管置于23℃～25℃下避光培养，待菌丝长满斜面2/3以上备用。 原种 6.2.1 容器 符合NY/T 528的规定，塑料制品符合GB 4806.7的规定。 6.2.2 培养料 推荐配方： a)棉籽壳60%、杂木屑20%、麸皮18%、石灰1%、石膏1%，培养基含水量60%～63%； b)杂木屑45%、玉米芯35%、麸皮18%、石膏1%、石灰1%，培养基含水量60%～63%。 6.2.3 配制灭菌 按NY/T 528的规定配制后分装入原种瓶（袋），121℃～123℃灭菌2 h。 6.2.4 冷却接种 料温冷却至25℃以下，按NY/T 528的规定接种，做好标记。 6.2.5 培养 接种后置于培养室，23℃～25℃遮光培养，空气相对湿度保持在55%～65%，二氧化碳浓度低于0.5%，当菌丝长满瓶（袋）时结束培养，培养全过程应少于30 d。培养期间按NY/T 528要求定期检查。 6.2.6 质量检验 培养完成后对菌种进行质量检验，检查要求应符合附录A的规定。 栽培种 6.3.1 容器 应符合NY/T 528的规定。宜使用（17 cm～18 cm）×35 cm×0.005 cm规格的聚丙烯塑料袋，塑料制品符合GB 4806.7的规定。 6.3.2 培养料 推荐配方： a)棉籽壳30%、杂木屑50%、麸皮18%、石灰1%、石膏1%，含水量60%～63%； b)杂木屑45%、玉米芯35%、麸皮18%、石灰1%、石膏1%，培养基含水量60%～63%。 6.3.3 配制灭菌 按NY/T 528的规定配制后分装入菌种袋，121℃～123℃灭菌2.5 h。 6.3.4 冷却接种 灭菌结束后在冷却室冷却至25℃以下，接种按NY/T 528的规定执行，每袋接种原种15 g～20 g。 6.3.5 培养 培养要求见6.2.5，待菌丝长满菌袋。 质量检验 培养完成后对菌种进行质量检验，检验要求应符合附录A的规定。 储藏 完成培养后，菌种应在4℃冷库内储藏，时间不应超过30 d。 7 液体菌种 母种 同6.1执行。 摇瓶种 7.2.1 容器 以1000 mL的三角瓶为宜。 7.2.2 培养基 马铃薯200 g、葡萄糖20 g、蛋白胨3 g、磷酸二氢钾2 g、硫酸镁0.5 g、加水至1000 mL。 7.2.3 配制灭菌 马铃薯煮汁过滤后，加入试剂加水至1000 mL搅拌均匀，装入摇瓶，装液量不超过摇瓶容量的1/5～2/5。装好的摇瓶放入高压灭菌锅内灭菌，121℃下灭菌30 min。 7.2.4 接种培养 培养基温度降至25℃以下，严格按照无菌操作程序，将母种块切割成3 mm～5 mm颗粒，接入待接种摇瓶培养基内，每100 mL液体培养基接种10粒。接种后置于振荡培养箱，25℃下150 rpm振荡培养5 d～6 d。 7.2.5 质量检验 培养完成后对菌种进行质量检验，检验要求应符合附录B的规定。 发酵罐菌种 7.3.1 容器 根据生产规模选择相应发酵罐的容积，以1000 L的规格为宜。 7.3.2 培养基 参考配方：玉米粉2000 g、蔗糖6000 g、葡萄糖1000 g、磷酸二氢钾500 g、硫酸镁250 g、水 1000 L，pH 值自然。 7.3.3 配制灭菌 原料搅拌均匀，不应有结块，转入发酵罐内，装液量不超过罐体容量的80%，加入0.03%消泡剂。121℃灭菌60 min。生产用水应符合GB 5749的规定。 7.3.4 接种培养 培养基温度降至25℃以下，维持罐体压力在0.03 MPa，快速接入摇瓶菌种。接种量为罐内培养基总体积的0.1%～0.2%。维持罐体压力在0.03 MPa，温度25℃，搅拌状态下培养5 d～7 d（根据品种特性而定）。 7.3.5 质量检验 培养完成后对菌种进行质量检验，检验要求应符合附录B的规定。 8 记录与留样 各级菌种按NY/T 528的规定建立生产记录并留样，档案保留2年以上