人羊膜上皮干细胞

【适用范围】 本文件规定了人羊膜上皮干细胞的技术要求、检验方法、检验规则、使用说明、标签、包装、储存、运输和废弃物处理要求。 本文件适用于人羊膜上皮干细胞的生产和检测。 【主要技术内容】 5 技术要求 5.1 原材料和辅料 5.1.1 应符合T/CSCB 0001要求。 5.1.2 应建立供者细胞采集的供者评估与筛选标准、采集方法、运输标准和交接标准，保证供者和细胞的安全。 5.1.3 供体应筛查HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV和TP，并记录结果。 5.2 分离与培养方法 5.2.1 分离及提取 人羊膜组织样本剪至片状，用胰酶消化法分离人羊膜上皮干细胞。进行人羊膜上皮干细胞原代培养。 5.2.2 人羊膜上皮干细胞换液 根据细胞的生长情况换液。 5.2.3 人羊膜上皮干细胞传代 传代操作应密度适宜、及时、迅速。 5.2.4 人羊膜上皮干细胞冻存 冻存细胞程序降温后置液氮中保存。 5.2.5 人羊膜上皮干细胞复苏 取出冻存管进行快速融化、离心洗涤后进行培养。 5.2.6 人羊膜上皮干细胞溶液 人羊膜上皮干细胞溶液应为均质状态，无絮状沉淀，细胞存活率≥90％。 5.3 关键质量属性 5.3.1 细胞形态 细胞贴壁培养时呈不规则多角型，铺路石样生长，形态均一。 5.3.2 染色体核型 正常核型应为46,XX或46,XY。 5.3.3 细胞存活率 未冻存细胞存活率≥90%且冻存复苏后细胞存活率≥70%。 5.3.4 细胞标志蛋白 CK19、CD29、CD44、CD73、CD90、CD105表达阳性； CD31、CD34、CD45和CD49d表达阴性。 5.3.5 免疫调节 经炎症因子（IFN-γ或者IFN-γ联合TNF-α）诱导后表达吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）。与T淋巴细胞共培养能抑制T淋巴细胞增殖及分泌IFN-γ、TNF-α。 5.3.6 三系分化 具有成骨、成脂和成软骨的分化潜能。 5.3.7 成瘤性 免疫缺陷动物（如小鼠）体内成瘤试验结果为阴性。 5.3.8 微生物 真菌、细菌、支原体、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP为阴性。 5.4 过程控制 5.4.1 扩增、冻存、复苏等过程控制应符合T/CSCB 0001要求。 5.4.2 细胞STR检测结果应与供体细胞保持一致。 6 检验方法