人脐带间充质干细胞

【主要技术内容】 5 技术要求 5.1 原材料和辅料 5.1.1 应符合 T/CSCB 0001-2022 要求。 5.1.2 应建立供者细胞采集的供者评估与筛选标准、采集方法、运输标准和交接标准，保证供者和细胞的安全。 5.1.3 供体应筛查 HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV 和 TP，并记录结果。 5.2 分离与培养方法 5.2.1 分离及提取 采用组织块贴壁法从脐带华氏胶组织中分离培养脐带间充质干细胞。进行人脐带间充质干细胞原代培养。 5.2.2 人脐带间充质干细胞换液 根据细胞的生长情况换液。 5.2.3 人脐带间充质干细胞传代 传代操作应密度适宜、及时、迅速。 5.2.4 人脐带间充质干细胞冻存 冻存细胞程序降温后置液氮中保存。 5.2.5 人脐带间充质干细胞复苏 取出冻存管进行快速融化，离心洗涤后进行培养。 5.2.6 人脐带间充质干细胞溶液 人脐带间充质干细胞溶液为均质状态，无絮状沉淀，细胞存活率≥90％。 5.3 关键质量属性 5.3.1 细胞形态 细胞贴壁培养时呈纺锤形和梭形的成纤维细胞态，形态均一。 5.3.2 染色体核型 正常核型应为 46,XX 或 46,XY 且 400-550 条段阶段未见染色体异常。 5.3.3 细胞存活率 未冻存细胞存活率≥90%且冻存复苏后细胞存活率≥70%。 5.3.4 细胞标志蛋白 CD105、CD73、CD90 阳性率均≥95%；CD11b、CD19、CD31、CD34、CD45、HLA-DR 阳性率≤2%。 5.3.5 三系分化 具有成骨、成脂、成软骨的分化潜能。 5.3.6 成瘤性 免疫缺陷动物（如小鼠）体内成瘤试验结果为阴性。 5.3.7 微生物 真菌、细菌、支原体、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP 为阴性。 5.3.8 干细胞对淋巴细胞增殖抑制 应满足下列要求： ——共培养组与阳性对照组相比，白介素 6、肿瘤坏死因子α表达下调，白介素 10 表达上调； ——共培养组与阳性对照组相比，淋巴细胞增殖被显著抑制； ——共培养组与阳性对照组相比，淋巴细胞亚群辅助性 T 细胞上调，细胞毒性 T 淋巴细胞下调。 5.4 过程控制 5.4.1 扩增、冻存、复苏等过程控制应符合 T/CSCB 0001-2022 要求。 5.4.2 细胞 STR 检测结果应与供体细胞保持一致。