桔梗茎叶中总多糖含量测定标准

【适用范围】 本文件规定了宁夏地区桔梗茎叶中总多糖测定术语、定义、原理、试剂、材料、仪器、设备、样本采集与制备、测定步骤、结果计算等。 本文件适用于宁夏地区桔梗茎叶中总多糖含量测定。检出限为20–200μg。 【主要技术内容】 用苯酚-硫酸法是糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，从而对桔梗茎叶中总多糖进行检测和确证。 7测定步骤 7.1 试样的制备 取桔梗茎叶样品于多功能粉碎机粉碎，过20目筛网备用。 7.2 试样的提取 称取过筛桔梗茎叶5 g（精确至0.0001 g）于250 mL圆底烧瓶，按料液比1:23加入44%乙醇，56℃，100 HZ（250W）超声43 min，提取两次，合并滤液，0.22 um滤膜过滤，滤液即为桔梗试样提取容溶液。 7.3 试样的测定 精密吸取50 uL桔梗茎叶提取溶液，加入1 mL 5%苯酚溶液混匀，加入5 mL浓硫酸，混匀，40℃水浴15min，冷水冷却后，吸取200 uL于96孔板中测定490nm波长处吸光度值。 7.4 标曲建立 精密吸取0.2 mg/mL D-无水葡聚糖标准品0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1mL，加入1 mL 5%苯酚溶液混匀，加入5 mL浓硫酸，混匀，40℃水浴15min，冷水冷却后，吸取200 uL于96孔板中测定490nm波长处吸光度值，绘制标准曲线。 8 结果计算 苯酚-硫酸法测定总多糖标准曲线Y= 3.211X + 0.053，R2 = 0.9998，桔梗茎叶提取物中总多糖含量占比为16.832%。