桔梗茎叶中总黄酮含量测定标准

【适用范围】 本文件规定了宁夏地区桔梗茎叶中总黄酮测定术语、定义、原理、试剂、材料、仪器、设备、样本采集与制备、测定步骤、结果计算等。 本文件适用于宁夏地区桔梗茎叶中总黄酮含量测定。检出限为5–50μg。 【主要技术内容】 用NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色法在碱性亚硝酸盐溶液中，黄酮类化合物与铝离子在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定反应产物在510nm处的吸光值即可计算样品中总黄酮含量。此法可对桔梗茎叶中总黄酮进行检测和确证。 7测定步骤 7.1 试样的制备 取桔梗茎叶样品于多功能粉碎机粉碎，过20目筛网备用。 7.2 试样的提取 称取过筛桔梗茎叶5 g（精确至0.0001 g）于250 mL圆底烧瓶，按料液比1:23加入44%乙醇，56℃，100 HZ（250W）超声43 min，提取两次，合并滤液，0.22 um滤膜过滤，滤液即为桔梗试样提取容溶液。 7.3 试样的测定 取20μL桔梗茎叶提取溶液于具塞试管中，加入300 μL10%亚硝酸钠溶液混匀，静置6 min，再加入300 μL 10%硝酸铝溶液，静置6 min，再加入4 mL10%氢氧化钠溶液混匀，最终用去离子水定容至10 mL。吸取200 μL反应液于96孔板，在510 nm条件下测定吸光度OD值。 7.4 标曲建立 分别吸取0.1 mg/mL 芦丁标准品溶液0.0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.5 mL于具塞试管中，加入300 μL10%亚硝酸钠溶液混匀，静置6 min，再加入300 μL 10%硝酸铝溶液，静置6 min，再加入4 mL10%氢氧化钠溶液混匀，最终用去离子水定容至10 mL。吸取200 μL反应液于96孔板，在510 nm条件下测定吸光度OD值。