金银花茎叶中绿原酸含量测标准

【适用范围】 本文件规定了宁夏地区金银花茎叶中绿原酸测定术语、定义、原理、试剂、材料、仪器、设备、样本采集与制备、测定步骤、结果计算等。 本文件适用于宁夏地区金银花茎叶中绿原酸含量测定。检出限为57–340μg/mL。 【主要技术内容】 高效液相色谱法以经典的液相色谱为基础，以液体为流动相，将不同极性的溶剂泵入装有颗粒极细的高效固定相色谱柱中，在色谱柱中被分离并进入检测器进行检测，从而实现对样本的快速、高灵敏的检测。通过此方法对金银花茎叶中绿原酸进行检测和确证。 7.1 试样的制备 取金银花茎叶样品于多功能粉碎机粉碎，过20目筛网备用。 7.2 液相溶液的制备 7.2.1 标准品溶液制备 准确称取3.4 mg绿原酸标准品， 50%甲醇定容10 mL容量瓶，即得0.34 mg/mL绿原酸标准对照品溶液。 7.2.2 试样品溶液制备 精密称取过筛金银花粉10 g，加入8倍水，浸泡30 min，煎煮30 min，过滤，滤渣加入7倍水，再次煎煮30 min，合并滤液，经旋转蒸发仪浓缩，真空冷冻干燥机干燥，即得金银花提取物。精密称取金银花提取物50 mg，50%甲醇定容至10 mL容量瓶，经0.22 um滤膜过滤，即得供试品溶液。 7.3试样的测定 吸取供试品溶液20μL，在流动相为乙腈-0.4％磷酸溶液（10﹕90），柱温30℃，波长327 nm，流速1mL/min条件下进样，重复测定3次。 7.4 标曲建立 取0.34 mg/mL绿原酸标准品适量，分别配置浓度为57、68、85、113、170、340 μg/mL的绿原酸标准溶液，在流动相为乙腈-0.4％磷酸溶液（10﹕90），柱温30℃，波长327 nm，流速1mL/min条件下进样，以峰面积对应的质量浓度建立绿原酸标准曲线。 8 结果计算 以峰面积值(Y)为纵坐标, 对照品进样量(X)为横坐标绘制标准曲线, 绿原酸回归方程为: Y=14897x - 2.4571，R2 = 0.9996，测得金银花茎叶提取物中绿原酸含量占比为1.585%（附录A）。