体外毒性试验标准方法优化指南 第2部分 皮肤刺激性测试的体外重建人类表皮模型试验方法

【适用范围】 本文件规定了体外重建人类表皮模型用于皮肤刺激性试验标准方法优化的开发、试验过程和验证评价要求；基本原则、开发验证和技术要点的指南； 本文件适用于化学品及相关产品基于体外重建人类表皮模型的皮肤刺激性试验标准方法的类似或优化方法的开发、验证和实施。 【主要技术内容】 3.1 适用范围 第一部分：标准适用范围 本文件规定了体外重建人类表皮模型用于皮肤刺激性试验标准方法优化的开发、试验过程和验证评价要求；基本原则、开发验证和技术要点的指南； 本文件适用于化学品及相关产品基于体外重建人类表皮模型的皮肤刺激性试验标准方法的类似或优化方法的开发、验证和实施； 3.2 规范性引用文献 3.3 术语和定义 第2部分列出10条与本标准相关的术语，包括：细胞活性、完整测试序列、一致性、半数抑制时间ET50、半数抑制浓度IC50、合格的运行、合格的测试、再现性、运行、测试。 4.4缩略语 列出与本标准相关的10个缩略语，GHS、HPLC、MTT、NSCkilled、NSC、NSMTT、OD。 4.5基本原则 1 一致性原则 已经过验证的参考方法由基本结构、功能和程序三个要素组成，与已验证的方法相比，类似或改进的方法在结构和功能都应当是一致的。通过体外方法的三个要素的核查，可以明确体外方法的特有性质、程序关键细节和质量控制措施。 2 方法依据 体外重建人类表皮模型用于皮肤刺激性测试应以OECD测试指南439作为改进方法的基础，具体到方法依据的重建模型，可能存在特定参数（例如表1和表2）或实验步骤有所不同的情况，拟提议的类似或改进的方法应当提供相应的值或操作步骤修改的说明。 3 性能的一致性评价 在新方法应用之前，应先使用参考化学评估其性能，以确定其可靠性和预测能力。这些化学物质来自于皮肤刺激体内动物实验的参考刺激物和非刺激物。以确保改进的方法能够根据联合国GHS制度正确地区分刺激性和非刺激性化学品。类似的或改进的测试方法与验证的参考方法（VRM）相比，具有相同或更好的再现性、敏感性、特异性和准确性。 4.6 方法开发和优化 1、重建表皮模型的基本结构 2、重建表皮模型的功能要求 3、标准方法的性能 4、结果解释和预测模型 4.7 标准方法的确认 1、参考化学物质清单 2、参考化学物质使用说明 对于标准化替代方法的实施，最重要的考查点是完成参考化学品的测试，并达到要求。本节对此做出详细的规定。包括：参考化学物质的选择原则、清单及组成特点及分类特征。 主要指出完成上述测试后，获得仿制或优化方法的可靠性和预测能力（即敏感性，特异性和准确性）的结果。为此需要满足的条件，包括： ---20种参考化学品 ---至少三个实验室中进行测试 ---不同时间点用不同批次的组织进行三个独立的运行测试。 ---每次运行应至少完成三个平行测试 ---阴性对照，阳性对照和适应性对照。