吉林长白山灵芝菌种生产技术规程

【适用范围】 本文件确立了吉林长白山灵芝菌种生产的程序，规定了术语和定义、场地环境、设施设备、制种技 术、检验规则、包装、运输等阶段的操作指示，描述了生产记录与档案追溯方法。 本文件适用于吉林长白山灵芝菌种生产要求。 【主要技术内容】 吉林长白山灵芝菌种生产技术规程 1 范围 本文件确立了吉林长白山灵芝菌种生产的程序，规定了术语和定义、场地环境、设施设备、制种技 术、检验规则、包装、运输等阶段的操作指示，描述了生产记录与档案追溯方法。 本文件适用于吉林长白山灵芝菌种生产要求。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 150.1 压力容器 第1部分：通用要求 GB 5749 生活饮用水卫生标准 GB 4806.7 食品用接触用塑料材料及制品 NY/T 1276 农药安全使用规范 总则 NY/T 1731 食用菌菌种良好作业规范 NY/T 1742-2009 食用菌菌种通用技术要求 NY/T 528-2010 食用菌菌种生产技术规程 3 术语和定义 GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 地理标志吉林长白山灵芝 Ganoderma lucidum from Changbai Mountain, Jilin Province 在中华人民共和国农业农村部吉林长白山灵芝（2018 年第 62 号）公告区域范围内，按照吉林长 白山灵芝生产技术生产，质量符合本标准要求的赤芝[Ganoderma lucidum（Ley ss. Ex Fr.）Karst]子 实体。 3.2 菌种 生长在适宜基质上具有结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。 [来源 GB/T 12728] 4 技术流程 5 场地环境 5.1 场地选择 5.1.1 选择地势高燥、平坦，通风良好，排水畅通，交通便利的场所，周边环境清洁，无污染源。 5.1.2 300 m 之内无规模养殖的禽畜舍、垃圾和粪便堆积场，无污水、废气、烟尘和粉尘等污染 源，50 m 内无食用菌栽培场所、集贸市场。 [来源：NY/T 528—2010 中 4.2，有修改] 5.2 生产用水 生产用水应符合 GB 5749 的规定。 6 设施设备 6.1 基本设施及布局 基础设施及布局应符合 NY/T 528 中 4.3 和 4.4.2 规定。 6.2 基本设备 天平（感量0.1g～0.001g）、高压灭菌锅（ 1.05kg/cm2）、粉碎机、磅秤、超净工作台或接种箱、 空调、除湿机、培养架、恒温培养箱、冰箱、显微镜等。生产量大的菌种厂还应配备搅拌机、装袋机。 7 制种技术 7.1 菌种选择 应选择经过省级及以上行业主管部门审（认）定或登记（备案）、具有食用菌菌种生产和经营资质 的供种单位购买，质量应符合 NY/T 1742 的规定。 7.2 一级种生产 7.2.1 PDA 培养基制作 称取 200 g 去皮的马铃薯，切成长和宽 0.5 cm 的条，加 1000 mL 水煮沸 20 min～30 min，8 层 纱布过滤，取滤液后定容至 1000 mL，加入 20 g 葡萄糖和 18 g～20 g 琼脂粉。 7.2.2 分装、灭菌 将配制好的 PDA 培养基分装至 18 mm × 180 mm 或 20mm × 200 mm 玻璃试管的 1/4 处。试管口 应保持干净，分装后塞入棉塞或硅胶塞，并用牛皮纸包扎。包扎好的直立放在高压灭菌锅内高压蒸汽灭 菌，121℃ 保持 30 min。 7.2.3 摆斜面 灭菌后的试管培养基冷却至 60℃±5℃ , 将试管倾斜摆放在操作台桌面上，试管口比试管底部高 1.5 cm±0.2 cm，摆成斜面培养基，斜面长度约为试管长度的 3/4。 7.2.4 无菌检验 随机抽取 5% 的试管斜面培养基（每批抽样量不得少于 10 支），在 35℃±1℃ 培养 2 d，检查 有无微生物菌落，无菌落的为合格。 7.2.5 接种 7.2.5.1 超净工作台或接种箱应彻底消毒后方可使用，在接种前用紫外灭菌灯照射 30 min， 接种人员应严格按照无菌操作要求进行手和衣物的消毒。 7.2.5.2 接种用具使用前在酒精灯火焰上灼烧灭菌、冷却。接种时一只手握斜面试管，另一只 手迅速拔开试管塞，用接种铲取 3 mm～5 mm 大小的菌种块迅速放在待接斜面培养基中央位置， 迅速用棉塞或硅胶塞塞好试管，整个操作过程应在火焰周围 10 cm 范围内进行。 7.2.5.3 将接种好的试管贴好菌种名称、接种日期的标签。 7.2.6 培养 接种后的试管置于 25℃±2℃ 的培养箱避光培养。于接种后第 2 天 和第 5 天 分别进行逐个检 查，挑出未活、污染和生长不良试管。 7.2.7 菌种质量标准 菌种质量应满足表 1 要求。 表 1 灵芝母种感官要求 项 目 要求 来源 容 器 完整、无损、洁净 NY/T 1742—2009 中表1 气味 无异味 拮抗线 无 NY/T 1742—2009 中表1,有修改 菌丝生长量 长满斜面 菌丝体特征 白色绒毛状、生长致密、均匀、健壮、 项 目 要求 来源 平整、无变黄 菌丝分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂 菌 无 斜面背面观 培养基不干缩、无水珠、无色素、颜色 均匀 棉塞或硅胶塞 干燥、整洁、松紧适度、既满足透气又 保证过滤空气 斜面长度 顶端距塞 30 mm±5 mm 7.2.8 母种保藏 在 4 ℃~6 ℃ 下避光保藏，保藏期不超过 90 天。 7.3 原种、栽培种生产 7.3.1 培养料 木屑、麸皮等要求新鲜、无虫、无螨、无霉、洁净、干燥。配方可选择下列其中之一： a) 阔叶木屑 78%，麸皮 20%，石膏 1％ ，过磷酸钙 1%； b) 棉籽壳 50%，阔叶木屑 30%，麸皮 17%，蔗糖 1%，石膏 1％ ，石灰 1%。 7.3.2 拌料 按照配方准确称取各种原材料，遵循先干拌再湿拌的原则搅拌均匀，或者使用拌料机拌料，培养料 含水量控制在 60% ± 1%。 7.3.3 装袋 7.3.3.1 拌料结束后立即装入聚丙烯塑料袋，聚丙烯塑料袋应符合 GB 4806.7 的要求。 7.3.3.2 原种袋采用规格为长（ 12 cm～17 cm） ×宽（22 cm～28 cm） ×厚（0.04 cm～0.06 cm）； 栽培种袋采用规格为长（15 cm～17 cm） ×宽（35 cm～38 cm） ×厚 0.05 cm 。 7.3.3.3 装料要求松紧适中，使用无棉盖体或周转棒封口，装好后在 4 h 内装锅灭菌。 7.3.4 灭菌 采用高压蒸汽灭菌，灭菌温度达到 121 ℃~126 ℃ 后保持 2.5 h～3.0 h。 7.3.5 冷却 灭菌结束后，灭菌锅内温度降至 50 ℃~60 ℃ , 趁热将料袋搬运到冷却室，冷却至 28 ℃±2 ℃ 。 7.3.6 接种 7.3.6.1 超净工作台或接种箱应彻底消毒后方可使用，在接种前用紫外灭菌灯照射 30 min， 接种人员应严格按照无菌操作要求进行手和衣物的消毒。 7.3.6.2 接种用具使用前在酒精灯火焰上灼烧灭菌、冷却。接种时一只手握斜面试管（或菌种 袋/瓶），另一只手迅速拔开试管塞（或打开菌种封口物），用接种工具取 3 mm～5 mm 大小的 菌种块（或 2 cm3 左右的菌种块或 2 根枝条菌种）迅速接入料袋中央位置，迅速用封口物封好料 袋，整个操作过程应在火焰周围 10 cm 范围内进行。 7.3.6.3 将接种好的试管贴好菌种名称、接种日期的标签。 7.3.7 培养 培养室使用前要彻底消毒和杀虫，药剂的选用和使用应符合 GB/T 8321（所有部分）和 NY/T 1276 的规定。培养室要求环境干净卫生，通风、避光、保温条件良好，温度控制在 25℃ ± 2℃。 7.3.8 培养期检查 培养 3 天后开始不定期检查菌袋，及时清理污染袋、生长不良等不合格菌袋。 7.3.9 菌种质量 原种和栽培种质量均应满足 NY/T 1742—2009 中 3.2 要求，同时还应满足表 2 要求。 表 2 灵芝二级种和三级种感官要求 项目 要求 来源 容器 洁净、完整 NY/T 1742—2009 中表1 培养基 贴壁、无干缩 气味 无异味 海绵塞或无棉盖体 干燥、洁净、松紧适度、能满足透气和滤 菌要求 NY/T 1742—2009 中表1,有修改 菌丝生长量 长满容器 菌丝特征 菌丝洁白、生长旺盛、整齐 培养基和菌丝体 培养基无干缩现象、无菌皮形成、无原基 形成 菌丝分泌物 无杂菌 无 7.3.10 原种、栽培种保藏 菌种长好后在 4℃ ~6℃ 避光保藏，保藏期不超过 45 天。 8 检验 按照 NY/T 1742 中第 5 章的检验方法进行检验，检验项目应全部符合 7.2.7 和 7.3.9 要求，任 何一项不符合要求的为不合格菌种。 9 包装、运输 9.1 包装 9.1.1 母种使用锡箔纸包好，外包装采用泡沫箱或有足够硬度的纸箱， 内部有缓冲作用的轻质材料填 充，要保证使用材料的洁净和空间卫生。要有合格证书和使用说明书。 9.1.2 原种和栽培种外包装宜采用有足够硬度的纸箱或塑料箱，菌种之间有缓冲作用的轻质材料填充， 要保证使用材料的洁净和空间的卫生。要有合格证书和使用说明书。 9.2 运输 9.2.1 不应与有毒物品混装运输。 9.2.2 宜采用冷链运输。 9.2.3 运输过程应有防震、防晒、防尘、防雨、防冻、防杂菌等措施。 10 生产记录与档案 应详细、准确、真实记录生产过程，记录信息如附录A，并建立生产记录档案，档案应保存至菌种 售出后 2 年，做到可追溯。 生产档案应记录生产地点、时间、数量、培养基配方、培养条件、菌种来源、操作人、技术负责人、 检验记录、菌种流向等内容。