五味子种质资源鉴定评价的数据采集规范

【适用范围】 本文件规定了五味子种质资源评价的数据采集技术要求，描述了数据采集的基本方法、基本信息、形态特征和生物学特性、品质特性、抗病性及其他特征特性、效果评价和记录与档案等追溯方法。 本文件适用于五味子种质资源的收集、整理、鉴定、评价和共享。 【主要技术内容】 1 范围 本文件规定了五味子种质资源评价的数据采集技术要求，描述了数据采集的基本方法、基本信息、形态特征和生物学特性、品质特性、抗病性及其他特征特性、效果评价和记录与档案等追溯方法。 本文件适用于五味子种质资源的收集、整理、鉴定、评价和共享。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期测定仪的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 2659 世界各国和地区名称代码 GB/T 2260 中华人民共和国行政区划代码 GB/T 12456 食品安全国家标准 食品中总酸的测定 GB/T 12404 单位隶属关系代码 NY/T 2742 水果及制品可溶性糖的测定 3,5-二硝基水杨酸比色法 NY/T 2594 植物品种鉴定 DNA分子标记法 总则 DB22/T 3512 五味子种质资源描述规范 ISO 3166 Codes for the Representation of Names of Countries 中华人民共和国药典（一部） 3 术语定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 五味子（wuweizi） 五味子科（Schisandraceae）五味子属（Schisandra）多年生藤本植物。 4 基本要求 4.1采集地点 环境条件应能够满足五味子植株的正常生长及其性状的正常表达，并满足五味子种质资源评价条件的五味子种质资源保存场圃。 4.2田间设置与管理 田间设置应确保鉴定材料能够正常生长发育。供鉴定的植株在鉴定取样后，田间剩余材料的数量能满足生长期结束前其他观测需要。鉴定园与大田管理措施基本相同。供果实性状鉴定的植株，不采取疏花、疏果等栽培技术措施。 4.3数据采集 原始数据的采集应在种质正常生长的盛果期情况下获得，包括形态特征、生物学特性、。如遇自然灾害或其他严重影响植株正常生长的因素，应重新进行观测试验和数据采集。 4.4数据统计分析和校验 每份种质的形态特征和生物学特性观测数据经 3 年度以上的观测校验，计算每份种质性状的平均值、变异系数和标准差，并进行方差分析，判断观测结果的稳定性和可靠性。取校验值的平均值作为该种质的性状值。 5 基本信息 5.1全国统一编号 五味子种质资源按照全国统一编号执行。每份种质有固定的编号作为唯一的检索根据。五味子全国统一编号为 8 位字符串。如“WWZ 00012”。如果当前没有全国统一编号，应标记“无”。 5.2圃编号 五味子种质资源在种质圃中的编号。每份种质具有唯一的种质圃编号，由 8 位字符串组成，如：“WWZC 0001”,C 为资源圃编号。 5.3引种号 五味子种质资源从国外引入时赋予的编号。由年份加顺序号组成，用 8 位阿拉伯数字表示，前 4位表示引进的年份，后 4 位为顺序号，每份引进种质具有唯一的引种号。如“20010001”，其中“2001”表示引种年份，“0001”表示顺序码。没有引种号，应该标记“无”。 5.4 采集号 五味子种质资源在野外采集时赋予的编号，由 10 位字符串组成，由年份加 2 位省份代码加 4 位顺序号组成。如“2021220002”，每份采集种质具有唯一的采集号。没有采集号，应该标记“无”。 5.5种质名称 五味子种质资源的中文名称。国外引进的种质如果无对应的中文名，可以直接写种质的外文名。如果有多个名称，可以放在英文括号内，用英文逗号分隔开。如“种质名称 1（种质名称 2,种质名称 3）”。 5.6 种质外文名 国外引进种质的外文名和国内种质的汉语拼音名。汉语拼音之间空一格，每个拼音的首写字母大写，如“嫣红”的拼写为“Yan Hong” 5.7 科名 科名由拉丁名加英文括号内的中文名组成，如“ Schisandraceae (五味子科)”。 5.8属名 属名由拉丁名加英文括号内的中文名组成，如“Schisandra (五味子属)”。 5.9学名 学名由拉丁名称加英文括号内的中文 组成，如“Schisandra chinensis(Turcz.) Baill.（五味子）”，如没有中文名，可直接填写拉丁名。 5.10原产国 五味子种质资源的原产国家名称、地区名称或国际组织名称。国家和地区名称参照 ISO 3166。如该国家已不存在，应在原国家名称前加“原”，如“原苏联”。国际组织名称用该组织的外文名缩写，如“IPGRI”。 5.11原产省 国内五味子种质资源原产省份名称，省份名称参照 GB/T 2260；国外引进种质原产省用原产国家一级行政区的名称。 5.12原产地 国内五味子种质资源的原产地，具体到县、乡（镇）、村，不能确定的注明“不详”。县名参照 GB/T 2260。 5.13海拔 五味子种质资源原产地的海拔高度。单位为 （m）。 5.14经度 原产地的经度，经度单位为（°）和（′）。格式为 DDDFF，其中 DDD 为度，FF 为分。东经为正值，西经为负值。 5.15纬度 原产地的纬度，纬度单位为（°）和（′）。格式为 DDFF，其中 DD 为度，FF 为分。北纬为正值，南纬为负值。 5.16来源地 国内五味子种质资源的来源省、县、乡、村的名称，国外引进种质的来源国家、地区或国际组织名称。国家（地区、国际组织）名称参照 ISO 3166，省、县名称参照 GB/T 2260。 5.17保存单位 五味子种质资源的保存单位名称。单位名称应写全称，并注明具体地点。 5.18 保存单位编号 五味子种质资源保存单位赋予的种质编号。保存单位编号在同一保存单位应具有唯一性。 5.19 种质类型 五味子种质资源类型分为：1 野生资源 2 农家品种 3 选育品种 4 品系 5 遗传材料 6 其他。 5.20 系谱 五味子选育品种（系）的亲本关系。 5.21 选育单位 五味子种质资源的选育单位或个人。单位应写全称，个人应注明详细通讯地址。 5.22 育成年份 品种（品系）培育成功的年份。 5.23 选育方法 五味子选育品种（品系）的育种方法。如“实生”、“杂交”、“芽变”、“辐射”、“地方品种” 等。 5.24图像 五味子种质资源的图像信息。图像格式为*.jpg。图像文件名由全国统一编号加半连号“-” 加序号加.jpg 组成。如有两个以上图像，则用英文分号分隔。 5.25观测地点 鉴定评价五味子种质资源的具体观测地点名称，记录到省、县、乡镇和村名。 6 形态特征和生物学特性 6.1新梢梢尖颜色 嫩梢长15 cm ～25 cm 时，随机调查充分见阳光的 30 个嫩梢梢尖，依据对照品种，目测种质嫩梢梢尖颜色。根据观测结果，用标准比色卡[英国皇家园艺学会标准比色卡（The RHS Colour Chart)）下同]，确定种质新梢梢尖颜色情况。 1 黄绿色 2 绿色 3 粉红色 4 红色 5 深红色 6.2 一年生枝节间长度 正常成年五味子树冠外围中部长枝中段节间平均长度。在休眠后至萌芽前进行，选择 3 株生长发育正常的植株，用钢卷尺每株测量 30 个一年生枝，取平均值。单位为 cm，精确到 0.1 cm。 6.3 一年生枝颜色 正常成年五味子树冠外围中部长枝颜色。在休眠后至萌芽前进行，选择 3 株生长发育正常的植株，目测 30 个一年生枝。根据观测结果，用标准比色卡确定种质一年生枝颜色。 1 黄色 2 黄褐色 3 暗褐色 6.4 叶片形状 正常成年五味子树冠外围成熟叶片形状。在长梢停生长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株， 采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片。根据观测结果并参照叶片形状图，确定种质叶片形状。 1 椭圆形 2 阔椭圆形 3 卵圆形 6.5 叶尖 正常成年五味子树冠外围成熟叶片叶尖形状。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株， 采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片。根据观测结果并参照叶尖形状图，确定种质叶尖形状。 1 尾尖 2 急尖 3 渐尖 6.6 叶基 正常成年五味子树冠外围成熟叶基形状。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株， 采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片。根据观测结果并参照叶基形状图，确定种质叶基形状。 1 楔形 2 圆形 6.7 叶缘形状 正常成年五味子树冠外围成熟叶片叶边缘形状。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株， 采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片。根据观测结果并参照叶边缘状态形状图，确定种质叶边缘状态。 1 全缘 2 浅锯齿 3 深锯齿 6.8 叶片长度 正常成年五味子树冠外围成熟叶片长度。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株， 用钢卷尺测量树冠外围长中部着生的成熟叶片长度。测量 30 片，取平均值。单位为（cm），精确到 0.1 cm。 6.9 叶片宽度 正常五味子树冠外围成熟叶片宽度。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株， 用钢卷尺测量树冠外围长枝中部着生的成熟叶片宽度。测量 30 片，取平均值。单位为（cm），精确到 0.1 cm。 6.10 叶柄长 正常成年五味子树冠外围成熟叶片叶柄长度。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株， 用钢卷尺测量树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片，取平均值。单位为（cm），精确到 0.1 cm。 6.11 叶柄颜色 正常成年五味子树冠外围成熟叶片叶柄颜色。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株，采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片的叶柄颜色，用标准比色卡确定叶柄颜色。 1 黄绿色 2 绿色 3 粉红色 4 红色 5 深红色 6.12 叶面颜色 正常成年五味子树冠外围成熟叶片正面颜色。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株，采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片正面颜色，用标准比色卡确定叶片正面颜色。 1 黄绿色 2 绿色 3 灰绿色 4 深绿色 5 墨绿色 6.13 叶背颜色 正常成年五味子树冠外围成熟叶片背面颜色。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株，采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片背面颜色，用标准比色卡确定叶片正面颜色。 1 灰绿色 2 绿色 6.14 叶背粉 五味子树冠外围成熟叶片叶背粉有无。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株，采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片叶 30 片背粉有无。 0 无 1 有 6.15 叶背叶脉糙毛 五味子树冠外围成熟叶片叶背叶脉糙毛有无。在长梢停长后进行，选择 3 株生长发育正常的植株，采用目测观测树冠外围长枝中部着生的成熟叶片 30 片叶脉糙毛有无。 0 无 1 有 6.16 花蕾形状 正常成年五味子树冠外围花蕾的形状。花蕾膨大期进行，选择 3 株生长发育正常的植株，采用目测观测树冠外围 10 朵花蕾形状。 1 卵圆形 2 圆柱形 3 长圆柱形 6.17 雌花心皮数 正常成年五味子树冠外围雌花心皮数量。盛花期至终花期进行，取中庸健壮母枝中部的30朵雌花，调查心皮数量，结果以平均值表示。 6.18 花梗长度 正常成年五味子树冠外围花梗长度。盛花期至终花期，取中庸健壮母枝中部的 30 朵雌花，用卡尺测量花梗长度，结果以平均值表示。单位（cm），精确到 0.1 cm。 6.19 内轮花被片腹面颜色 正常成年五味子树冠外围花朵内轮花被片腹面颜色。盛花期进行，取中庸健壮母枝上完全展开的 30朵雌花，观察内轮花被片腹面颜色。根据观察结果，用标准比色卡确定种质内轮花被片腹面颜色。 1 白色 2 基部 1/3 红色 3 基部 1/2 红色 4 基部 2/3 红色 5 红色 6.20 花冠大小 正常成年五味子树冠外围花冠径大小。盛花期进行，选择中庸健壮母枝上完全展开的 30 朵雌花，用卡尺测量花朵的最大直径，结果以平均值表示。单位（cm），精确到 0.1 cm。 6.21 萌芽始期 芽外覆盖的革质鳞片开始分开，露出带色的嫩叶，既为芽的萌动期。当 5% 的芽萌动为萌芽始期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”，其中“YYYY”为年，“MM”为月，“DD”为日。 6.22 始花期 植株全树约有 5% 花朵完全开放的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”，其中“YYYY”为年，“MM”为月，“DD”为日。 6.23 盛花期 植株全树约有 50% 花朵完全开放的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”，其中“YYYY”为年，“MM”为月，“DD”为日。 6.24 终花期 植株全树约有 95% 花朵完全开放，其中 75% 的花开始花被片脱落的日期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”，其中“YYYY”为年，“MM”为月，“DD”为日。 6.25 成熟期 浆果颜色、硬度及内在质量均达到品种（品系）的典型性状，此期为生理完熟期。以“年月日”表示，格式为“YYYYMMDD”，其中“YYYY”为年，“MM”为月，“DD”为日。 6.26 穗柄长度 成熟期调查。随机调查 30 个典型果穗，用尺子测量从结果枝上穗柄着生点至第一果粒着生点的长度，单位（cm），精确到 0.1 cm。 6.27 果穗长度 成熟期调查。以 6.25 中采集的 10 个果穗为测量对象，用尺子测量果穗的最大长度，取平均值。单位（cm），精确到 0.1 cm。 6.28 果穗紧密度 成熟期调查。以 6.25 中采集的 30 个果穗为测量对象，确定果穗紧密度。 1 松 2 中 3 紧 6.29 果托颜色 成熟期调查。以 6.25 中采集的 30 个果穗为测量对象，观察果托颜色。根据观察结果，用标准比色卡确定种质果托颜色。 1 黄绿色 2 绿色 3 粉红色 4 红色 5 深红色 6.30 果穗果粒数 成熟期调查。以 6.25 中采集的 10 个果穗为测量对象，以单穗为统计单位，计算每果穗的平均果粒数。单位为粒。 6.31果穗重量 成熟期调查。以 6.25 中采集的 10 个果穗为测量对象，分别称重或总体称重，计算平均值。单位为 （g），精确到 0.1 g。 6.32 果粒重量 成熟期调查。以 6.25 中采集的 10 个果穗为测量对象，从每个果穗的中部各取 3 个有代表性的果粒，共 30 个果粒，用天平称总重量，计算单个果粒重的平均值。单位为 （g），精确到 0.1 g。 6.33 果粒粒径 成熟期调查。以 6.31 中采集的 30 个果粒为测量对象，用卡尺测量果粒粒径，计算单个果粒粒径的平均值。单位（cm），精确到 0.1 cm。 6.34 果皮颜色 成熟期调查。以 6.25 中采集的 10 个果穗为测量对象，用标准比色卡确定果粒的果皮色泽。 1 黄色 2 橙色 3 粉红色 4 红色 5 紫红色 6 紫黑色 6.35 果肉颜色 成熟期调查。以 6.25 中采集的 10 个果穗为测量对象，用标准比色卡确定果粒的果肉色泽。 1 白色 2 粉色 3 红色 6.36 种子颜色 成熟期调查。果实成熟后采种子，置阴处晾干。选择发育正常的成熟种子 30 粒，用标准比色卡确定种子颜色。 1 黄褐色 2 褐色 3 红褐色 4 灰褐色 6.37 种子百粒重 成熟期调查。果实成熟后采种子，清洗干净后置于阴凉处使其干燥。剔除杂物和破粒，称量 100 粒经过精选的干种子的重量。取样三次重复，取平均值。单位为（g），精确到 0.1 g。 6.38 果实发育天数 记录终花期到果实成熟期所历天数，即为果实发育天数。单位为（d）。 7 品质特性 7.1 可溶性固形物含量 果实成熟期，选取不同果穗有代表性的果实 10 粒，挤压破碎后取其汁液，用手持折光仪测定可溶性固形物的含量。测定前，用蒸馏水将折光仪的刻度调至 0%。直接读取读数，以 % 表示，精确到 0.1%，测定三次，取平均值。 7.2 可溶性糖含量 果实成熟期，选取有代表性的果实，压汁后称取原汁 20 g，转入 250 ml 容量瓶中，用蒸馏水定容后，过滤，备用。具体测定方法根据 NY/T 2742 操作，以 % 表示，精确到 0.1%。 7.3 可滴定酸含量 果实成熟期，选取有代表性的果实，压汁后称取原汁 50 ml，转入 250 ml 容量瓶中，用蒸馏水定容后，过滤，备用。具体测定方法根据 GB/T 12456 操作，以 % 表示，精确到 0.1%。 7.4 五味子醇甲含量 干燥果实中五味子醇甲含量占样品总重量的百分率。按照中华人民共和国药典（一部）操作，以 %表示。精确到 0.01%。 7.5 果实灰分含量 经灼烧后得到的灰分重量占样品总重量的百分率。以 % 表示，精确到 0.01%。 7.6 果实折干率 每 100 克新鲜浆果干燥后得到的干物质重量。果实成熟期，选取有代表性的果实 100 g, 自然阴干，用电子天平称量干物质重量。以 % 表示，精确到 0.1%。 7.7 干果百粒重 每 100 粒干燥果实的重量，果实成熟期，选取有代表性的果实 100 粒, 自然阴干，用电子天平称量干燥果实重量。单位（g），精确到 0.1 g。 7.8 干果表面颜色 果实干燥后表面颜色。果实成熟后自然阴干，用标准比色卡确定干果表面颜色。 1 淡黄褐色 2 淡红色 3 红色 4 紫红色 5 黑色 8 抗病性 8.1 白粉病抗性 田间自然鉴定。 对五味子白粉病的抗性鉴定在发病盛期的不同时间分两次调查自然条件下田间发病情况。 病情调查及分级计算方法：每份供鉴定的种质调查叶片 200 个。按照叶片病斑面积占全叶面积百分率分为 0 级～7 级： 病级 病情（叶片病斑面积或感病果实的百分率“%”） 0 0% 1 5.0% 以下 2 5.0%～15.0% 3 15.0%～30.0% 4 30.0%～45.0% 5 45.0%～65.0% 6 65.0%～85.0% 7 85.0% 以上 计算病情指数，公式为： DI = ×100 式中：DI ——病情指数 si ——发病级数 ni ——相应发病级别叶片或果粒数 N ——调查的总叶片或果粒数 7 ——最高病级 种质对白粉病的抗性依病情指数分 5 级。 1 高抗（HR）（病情指数 ≤ 5） 3 抗 （R） （5 ＜ 病情指数 ≤ 25） 5 中抗 （MR） （25 ＜ 病情指数 ≤ 50） 7 感 （S） （50 ＜ 病情指数 ≤ 75） 9 高感 （HS） （病情指数 ＞ 75） 8.2 黑斑病抗性 田间自然鉴定。 对五味子黑斑病的抗性鉴定在发病盛期的不同时间分两次调查自然条件下田间发病情况。 病情调查及分级计算方法：每份供鉴定的种质调查 3 株树，每株树调查叶片 100 个。按照叶片病斑面积占全叶面积百分比分为 0 级～9 级： 病级 病情（叶片病斑面积或感病果实的百分率“%”） 0 0% 1 10% 以下 3 10%～25% 5 26%～40% 7 41%～65% 9 65% 以上 计算病情指数，公式为： DI = ×100 式中：DI ——病情指数 si ——发病级数 ni ——相应发病级别叶片或果粒数 N ——调查的总叶片或果粒数 9 ——最高病级 种质对黑斑病的抗性依病情指数分 5 级。 1 高抗（HR）（病情指数 ≤ 5） 3 抗 （R） （5 ＜ 病情指数 ≤ 25） 5 中抗 （MR） （25 ＜ 病情指数 ≤ 50） 7 感 （S） （50 ＜ 病情指数 ≤ 75） 9 高感 （HS） （病情指数 ＞ 75） 9 其他特征特性 9.1 种质用途 五味子种质用途为果实、植株或两者兼用。五味子浆果用途为药用、酿酒、制汁或其他用途。五味子的植株用途为砧木，观赏或其他用途。 9.2 指纹图谱与分子标记 对进行指纹图谱分析或重要性状分子标记的五味子种质，记录指纹图谱或分子标记的方法，并注明所用引物、特征带的片段大小或序列以及标记的性状和连锁距离。具体测定方法根据 NY/T 2594 操作，推荐引物序列及信息见附录 A。 9.3 备注 五味子种质特殊描述符或特殊代码的具体说明。 附录Ａ （规范性附录） 9对引物名单及序列信息 9对引物名单及序列信息见表 A.1。 A.1 9对引物名单及序列 引物编号 引物名称 正向引物（5’→3’） 反向引物（5’→3’） 退火温度（℃） S01 SSR19 CTCTCTCGCTTCATTCACCC TCATCACTGTTCGATTCCCA 63 S02 SSR29 TCCATGAGGTTTTCCCAGAG TGGATGGATCGTATGGTTTG 63 S03 SSR35 CAAGCTTTCTTTCCCTCGTG GATGATCAGGTGTGGTCCCT 60.7 S04 SSR41 ACCATCTCCACTTTCGCAAC ATCTGGAACTGTGATTGGGC 64 S05 SSR44 CCCAGGAAAGACCAGATGAA CTCTCAAGCACCAGGGACTC 60.7 S06 SSR95 ACTGCCATTCGCATTACTCC TACGGATGGGAAGGTGAGAG 60 S07 SSR107 TGGATTTCAAATGTCTGCCA AGAGGGGGAGGGGATAATTT 61 S08 SSR145 GGGGATTTGGTTTTGGTTCT AATGGCGAATAGACAAACGG 60 S09 SSR153 GAAGTGGTTGTGGCTTTGGT AGGAGAGTGGTGAGGCAAAA 60