标准摘要
【适用范围】 本文件规定了灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞及体外培养的操作程序和一般原则，描述了相应的方法 【主要技术内容】 6 细胞提取： 6.1 无菌准备--在开始实验前，超净台应使用紫外灯照射25分钟。解剖工具、离心管以及BAL灌洗液(含0.5 mM EDTA的PBS)等实验期间所需所有耗材及试剂均应进行高压灭菌，并在无菌环境中烘干至完全干燥。应保证所有提取过程均在超净台中进行。 6.2 细胞收集---按每只小鼠准备一个15 mL的离心管，管内装有3 mL DMEM完全培养基（10%胎牛血清）。然后将BAL灌洗液在水浴中加热至37 ℃，并且在整个实验过程中要注意保持温度不变。 6.3 细胞培养--在300 g, 4 ℃的条件下，将收集到的BAL灌洗液离心5分钟，去除上清，将沉淀物用DMEM完全培养基重悬后置于6孔板中，4小时后弃去上清，换液，并提高胎牛血清含量至20%以促进其增殖。 6.4 工艺要求--对提取小鼠肺泡巨噬细胞灌洗液中EDTA的含量、成分、温度以及体外培养等条件进行摸索，建立基于提取细胞数量、质量和纯度等参数的评价体系。